Как проводится анализ на боррелиоз?

Полимеразная реакция цепи

Этот анализ является современным способом выявления различного рода заболеваний, в том числе и боррелиоза. В последнее время все чаще отдается предпочтение именно ему. Среди преимуществ можно отметить следующее:

• технологичность забора материала;
• высокая надежность результатов;
• чувствительность диагностики выше, чем у других применяемых методик;
• может не только выявить инфекционного возбудителя, но и определить его количество.

Иммуноферментное исследование

Расшифровка результатов

Количество антиборрелиозных агентов IgG класса к патогенным микробам, вызывающим боррелиоз:

• показатель до 16 - инфекции нет;
• от 16 до 22 - есть сомнения;
• 22 и выше - результат положительный.

Anti-Borrelia IgM:

• ниже 0,8 - боррелий не обнаружено;
• в рамках 0,8-1,1 - анализ сомнительный;
• выше 1,1 - положительный.

Стоит отметить, что если отрицательный серологический анализ получен в начале развития заболевания, то не значит, что в организме нет боррелиоза. Такая особенность связана с тем, что антитела к боррелиозным антигенам могут определяться только через 3-6 недель после появления типичных симптомов. В этом случае необходима пересдача материала.

При сомнительном результате человеку рекомендуют сдать повторный анализ через 7 дней, так как он чаще всего выявляется на начальной стадии инфицирования или на фоне приема антибиотиков.

Контрольные анализы рекомендуется сдавать в тех же условиях, что и первые, обращаясь к услугам той же лаборатории, обязательно в утреннее время и с соблюдением определенных правил.

У некоторого количества пациентов (в среднем у 7-8%), не имеющих в организме боррелий, анализ повышен. Это бывает в случае развития эндокардита, мононуклеоза инфекционного происхождения или же наличии спирохет другого типа.

Иммуноглобулины М (IgM) могут выявляться через 14-28 дней со времени инфицирования. Их образование происходит перед появлением иммуноглобулинов, относящихся к G классу. Но у некоторых пациентов синтез IgM может происходить с опозданием или же не происходить вообще.

Кровь на клещевой энцефалит и боррелиоз в этом случае сдается не раньше трех недель после укуса.

Культуральный метод

Получение результата основывается на изоляции болезнетворного микроба, в этом случае - боррелии, из биоматериала на питательную среду. Для анализа подходит практически любая жидкость или ткань человеческого организма - кровь, спинномозговая, внутрисуставная, лимфатическая жидкость, ткани биопсии и др.

Боррелии очень требовательные в вопросах культивирования, поэтому ученые долгие годы создавали подходящую среду, котораяносит название Barbour-Stoenner-Kelly.

Основными условиями для успешного культивирования являются:

• получение биоматериала в начале развития инфекции;
• стерильность во время забора;
• скорейшая транспортировка в лабораторию и помещение на питательную среду.

Выявить боррелиоз таким методом удастся только в том случае, если больной еще не начал курс антибиотикотерапии.

Самый точный результата анализа выявляется из биоптатов, полученных с области укуса - в 60% случаев удается изолировать микробы. При хроническом атрофическом акродерматите (ХААД) это процент выше и достигает 90%.

Подобный анализ крови на боррелиоз имеет самый низкий показатель положительного результата - от 1% до 3%, при заборе ликвора или внутрисуставной жидкости эта цифра варьируется от 15 до 25%.

Считается, что культуральная методика, не смотря на все свои преимущества, не подходит для практического использования. Исследование может длиться от 3-х до 10 недель, стоит дорого, а по эффективности все же уступает наиболее современным способам. Чаще всего ее применяют для научных изысканий, для получения боррелиозной биомассы, котораянеобходима для исследовательской деятельности.

Методика Вестерн-блот

На сегодняшний день считается самым точным диагностическим методом для выявления боррелий. Он основывается на аналитическом подходе к определению в материале специфичных белков.

Прежде всего, применяется электрофорез для структурного разделения белков. Затем их переносят на специальную мембрану, а после применяются детекторы с антителами, специфичными к данному белку.

Вестерн-блоттинг отличается от предыдущего метода тем, что серологическое исследование определяет общее количество антител, специфического и неспецифического характера. Тестирование может дать положительный результат из-за того, что в анализе присутствуют антитела к неспецифическим антигенов.

Методика же Вестерн-блота высокоспецифичная. Выявляя антитела, она определяет против какого типа возбудителя они вырабатываются. Это позволяет исключить влияние на результат анализа перекрестных реакций, связанных с неспецифичными антигенами.

Если рассматривать чувствительность, белковый блоттинг несколько проигрывает анализу ИФА, например, когда в организме пациента присутствует вирус иммунодефицита, он может дать отрицательный ответ.

Возможность получения ложноположительного результата в иммуноферментном исследовании при наличии ВИЧ требует комплексной диагностики, учитывая ИФА, Вестерн-блоттинг, клиническую картину и эпидемиологическое состояние.

Анализ на иммуноглобулин G.

В этом случае кровь на боррелиоз берут, чтобы определить стадию развития инфекции, иммуноглобулин отвечает за вторичный ответ иммунной системы. Существует 3 фазы: острое развитие, хроническое и инфекционное. В норме показатели результата должны быть следующими:

• у взрослых пациентов - от 7 до 16;
• подростков от 11 до 16 лет - от 6,98 до 15,6;
• детей от 5 до 10 лет - от 5,04 до 9,16;
• детей от 2-х до 5 лет - от 4,53 до 9,16.

Пониженное количество иммуноглобулина G может сигнализировать о наличии иммунодефицита.

Метод реакции непрямой флюорисценции (РНИФ).

Этот способ позволяет выявлять антитела к возможным антигенам, путем окрашивания биоматериала флюорохромом и изучения его под микроскопом с люминесцентным освещением.

Обладает некоторыми преимуществами перед методом РИФ, т.к. может не только выявить антигены, но и определить титры антител. Повышенная чувствительность этого метода позволяет, применяя одинаковую сыворотку, обнаруживать различные антигены вирусного и бактериального происхождения.

На первом этапе исследования антитела взаимодействуют с антигеном, на втором происходит ферментативная индикация антигенов.

Прямая микроскопия.

Для данного анализа сдается кровь, ликвор, ткани, полученные путем биопсии, клещевой гомогенизат. Результаты микроскопического исследования не совсем достоверны, после окрашивания микробы утрачивают структурность и сложно определить: патогенные они или нет. Для данного метода при низком содержании боррелий в крови нередко биологическую жидкость концентрируют, пропуская ее через центрифугу.

При данном способе выявления баррелиоза присутствует вероятность ложноотрицательного результата.

Когда и как проходят диагностику?

Все вышеперечисленные диагностические методы используются в разные периоды развития болезни.

Анализ ПЦР проводят через 1,5 недели после возможного инфицирования, иммуноферментное исследование и РНИФ - через 30 дней.

Учитывая нюансы каждого способа, необходимо, чтобы расшифровкой результатов занимался инфекционист с опытом, иначе высоки риски получить недостоверную информацию.